核細(xì)胞的mRAN是單順反子，其最顯著的特征是具有５'端帽子結(jié)構(gòu)和3'端的poly A的結(jié)構(gòu)，此poly A結(jié)構(gòu)為mRNA的提取提供了有效的途徑，人們利用堿基配對(duì)原理，采用寡聚Ｔ結(jié)構(gòu)作為親和柱材料，當(dāng)含mRNA的總RNA樣品流經(jīng)寡聚Ｔ柱時(shí)，mRAN即被特異性的結(jié)合到柱上，從而可與其它RNA相分開，這就是寡聚(dT)纖維素或寡聚(U)瓊脂糖親和柱分離mRAN的原理。目前雖然mRNA的提取已有多種方法，如超速離心法、免疫法，但較常用的、簡(jiǎn)便的方法還應(yīng)是柱層析法。不過(guò)近幾年,mRNA的提取方法又有所改進(jìn)和突破,mRNA的磁珠分離即是這些新方法中的一類主要技術(shù)。該技術(shù)建立于３類強(qiáng)有力的相互作用上，即A與T堿基間的強(qiáng)配對(duì)性；鏈菌素抗生物素與生物素間的強(qiáng)免疫作用及稀土元素磁鐵與順磁性物質(zhì)間的強(qiáng)磁性作用。mRNA的磁珠分離技術(shù)提取mRNA的原理主要為用生物素標(biāo)記的Oligo(dT)與mRNA3'端的poly A退火形成雜交體，然后用帶有親和素(鏈菌素抗生物素)的順磁磁珠洗滌并捕獲雜交體，形成雜交體－磁珠復(fù)合體，最后用磁架將此復(fù)合體捕獲，這樣mRNA即可與其它形式的RNA相分開，進(jìn)一步用無(wú)RNase無(wú)菌水洗滌，即可獲得純化的mRNA。
方法一:磁珠法提純mRNA
一：儀器 水浴離心機(jī) 取液器 分光光度計(jì)
二：試劑 mRNA 分離系統(tǒng)試劑盒,異丙醇， 3MNaAC
三:磁珠法分離mRNA的原理圖示如下：
四：操作
（一 ）生物素標(biāo)記的Oligo(dT)探針與mRNA的煺火
１：在DEPC處理過(guò)的1.5mlEppendof管中，加入0.2-1mg的總RNA和無(wú)RNase的水至終體積為0.5ml。
２：65℃加熱10min
３：加入2μl生物素標(biāo)記的Oligo(dT)探針和12μl的20×SSC于RNA中輕輕混勻，室溫放置，逐漸冷卻平衡至室溫，此步操作一般需10min。
（二）親和素順磁磁珠（SA-PMPS）的沖洗
4：將SA-PMPS輕晃開后，放入磁性分離架中，使SA-PMPS集中于試管一則(約30秒)， 小心去除上清（不用離心方法）用1.5ml0.5×SSC漂洗SA-PMPS，用磁性分離架集中磁珠，去除上清，漂洗３次。
5：將漂洗過(guò)的SA-PMPS重新懸浮于0.2ml0.5×SSC中。
雜交體的生成及漂洗
6：將上步"３"中褪火的生物素標(biāo)記的Oligo(dT)探針，全部加到上步"5"管中,輕輕混勻，室溫放置10min。每隔2分鐘輕輕混勻一次
7：用磁性分離架捕獲磁珠，吸棄上清。
8：用0.3ml0.1×SSC漂洗SA-PMPS，用磁性分離架集中磁珠，吸棄上清，漂洗4次。
（三）洗滌收集mRNA
9：將漂洗過(guò)的SA-PMPS重新懸浮于0.2mlDEPC水中。
10：用磁性分離架捕獲磁珠，將洗脫的水相吸至一新管中。重復(fù)洗滌一次，吸取水相，兩次水相合并(約0.25ml)
11：在洗脫液中加入0.1體積的NaAC,1體積的異丙醇，－２０℃沉淀過(guò)夜，12000g 離心10min,75%乙醇洗沉淀，真空干燥。
12：提取mRNA質(zhì)量的分光光度計(jì)檢測(cè)，將所提mRAN分別在260,280nm比色，要求A：OD260％/ OD280％不小于2.0及40μg所提樣品在OD260％的值為1 .
13:提取mRNA質(zhì)量的電泳檢測(cè)，在1%的變性膠上，EB染色后，mRNA應(yīng)在0.5-8Kb間均勻著色，1.5-2Kb間著色較強(qiáng)。
方法二:親和柱層析法提純mRNA
該方法利用mRNA上的寡聚A可與較聯(lián)寡聚T的纖維素柱在高鹽下以堿基配對(duì)形式發(fā)生親和吸附，而在低鹽下，堿基配對(duì)能力破壞，吸附解除，而其他成分的RNA則不具該特性，因此在高鹽下當(dāng)RNA抽提樣品流經(jīng)該柱時(shí)，mRNA被掛在柱上，而其他RNA則隨高鹽溶液流出；當(dāng)用低鹽洗脫液洗柱時(shí)，mRNA隨洗脫液流出。再用有機(jī)溶劑沉淀則可得純化mRNA。
一：儀器，層析系統(tǒng)，其他同方法一
二：試劑，
柱材Oliga(dT）－纖維素
上樣液：20mMTris-HCL(pH 7.6)
0.5M NaCL
1mM EDTA (pH 8.0)
0.1% 十二烷基肌氨酸鈉（SLS）
洗脫液：10mM Tris-HCL(pH 7.6)
1mM EDTA(pH 8.0)
0.05% SDS
三：操作
1：DEPC處理層析柱
2：0.1M NaOH處理Oliga(dT）－纖維素
3：用1×上樣液洗柱至pH< 8.0
4:無(wú)菌水溶解RNA，65℃溫浴5分鐘后，迅速冷卻至室溫，加等體積2×上樣液，上樣，分部收集。
5：1倍體積1×上樣液洗柱，分部收集。
6：OD260沉淀收集液，確定收集液的該值是否接近0，如該值仍很大，則上樣液繼續(xù)洗柱，直至該值接近0。
7：2－3倍柱床體積的洗脫液，洗柱，分部收集。
8：測(cè)定各收集管的OD260，將有吸光值的各管合并。
9：進(jìn)行方法一的“11－13”步。
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