Cellstain- DAPI試劑貨號：D212
4’6-二脒-2-苯胺，二鹽酸鹽
Cellstain- DAPI
商品信息
儲存條件：-20度保存，避光
運輸條件：室溫
分子式：
C16H17Cl2N5
分子量：
350.25
特點：
● 可用于流式細胞儀
● 活細胞核染色試劑
● 激發和發射波長分別為488 nm和530 nm
選擇規格：
1 mg
細胞染色
規格
特性：該產物為黃色至微黃色的綠棕色粉末或固體，可溶于水和稀鹽酸。
水溶性：試驗成功
NMR光譜：試驗成功
產品概述
熒光染料DAPI是一種可對DNA染色的細胞核染色試劑，常用于細胞凋亡檢測。DAPI是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑，它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區。盡管DAPI不能通過活細胞膜，但卻能穿透擾亂的細胞膜而對細胞核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來檢測酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色體DNA。DAPI-DNA復合物的激發和發射波長分別為360 nm和460 nm。
熒光特性
λex=360 nm, λem=460 nm
操作說明
產品使用步驟
1.用PBS或適當的緩沖液制備10-50μMDAPI溶液。a）
2.在細胞培養基中加入體積為細胞培養基1/10的DAPI溶液。b）
3.將細胞在37℃下孵育10-20分鐘。
4.用PBS或適當的緩沖液清洗細胞兩次。
5.使用帶有360 nm激發光和460 nm發射濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。
a）由于DAPI可能致癌，因此在處理過程中必須格外小心。
b）或者您可以用1/10濃度的DAPI緩沖溶液代替培養基。
注意事項
制備DAPI儲備溶液時要用水（難溶于PBS）。
但是，那些溶解在水中的物質不適合長期儲存。
考慮長期存儲時，請使用解決方案類型產品-Cellstain?-DAPI解決方案（代碼：D523），以提高解決方案的穩定性。
文獻
1) W.Schnedl,A.V.Mikelsaar,M.Breitenbach and O.Dann,”DIPI and DAPI: Fluorescence Banding with Only Negligible Fading”,Hum. Genet.,1977,36,167.
2) I.W.Taylor and B.K.Milthorpe,”An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations”,J.Histochem. Cytochem.,1980,28(11), 1224.
3) F.Otto and K.G.Tsou,”A Comparative Study of DAPI,DIPI,and Hoechst 33258 and 33342 as Chromosomal DNA Stains”,Stain Technol.,1985,60, 7.
4) N.Poulin, A.Harrison and B.Palcic,”Quantitative Precision of an Automated Image Cytometric System for the Measurement of DNA Content and Distribution in Cells Labeled with Fluorescent Nucleic Acid Stains”,Cytometry,1994,16,227.
5)M.Kawai,N.Yamaguchi and M.Nasu,”Rapid Enumeration of Physiologically Active Bacteria in Purified Water Used in the Pharmaceutical Manufacturing Process”,J.Appl. Microbiol.,1999,86(3),496.
常見問題Q&A
| Q1核染色中所用染料的特征和區別是什么？ |
| A1:這里引入的染料具有通過與核酸相互作用而發出熒光或增加熒光強度的特性。
除熒光波長以外的差異如下。
[EB]
它沒有堿基特異性，可與所有DNA和RNA結合。
它沒有活細胞的膜通透性，并且可以染色死細胞。
[PI]
像EB一樣，它沒有基礎特異性。它是一種更廣泛使用的染料，因為插入時它的熒光強度比EB高。
它沒有活細胞的膜通透性，并且可以染色死細胞。
[DAPI]
與雙鏈小槽結合。它與腺嘌呤-胸苷簇具有高度結合。
它沒有活細胞的膜通透性，并且可以染色死細胞。
[AO]
通過利用插入雙鏈時和與單鏈磷酸結合時熒光波長不同的事實，可以在雙鏈和單鏈之間進行區分。
它滲透到活細胞的細胞膜上。
[Hoechst33342，33258]
它與DNA的腺嘌呤胸苷部分特異性結合。
它是一種顏料，可以滲透到活細胞的細胞膜上并染色活細胞的DNA。 |
| Q2：細胞染料的激發波長和發射波長是多少。 |
| A2： |
| Q3如何使用DAPI進行核染色？ |
| A3:有以下使用情況報告示例。制備DAPI儲備溶液時要用水（難溶于PBS）。
但是，那些溶解在水中的物質不適合長期儲存。
對于長期存儲，請使用解決方案類型產品-Cellstain?-DAPI解決方案（貨號：D523），具有更高的解決方案穩定性。使用時，用緩沖液或有機溶劑將儲備溶液稀釋至所需濃度。
[使用DAPI進行細胞染色的示例]
包含實體瘤或簇的樣品的DAPI染色示例（參考文獻3）
1）用0.02％胰蛋白酶-EDTA處理，在37°C下孵育30分鐘，以1,500 rpm離心5分鐘，然后沖洗上清液。
2）在-20°C下用50％甲醇（也可以使用乙醇）固定后，以1,500 rpm離心5分鐘以除去上清液。
3）在-20℃下用30％甲醇洗滌后，以1,500rpm離心5分鐘以除去上清液。
4）用0.2 M磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）洗滌后，以1,500 rpm離心5分鐘以除去上清液。
5）每106個細胞添加0.2 mL的RNase的0.2 M磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）（pH 7.2）（1 mg / mL），并在37°C下孵育30分鐘。
6）用0.2 M磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）洗滌后，以1,500 rpm離心5分鐘以除去上清液。
7）加入10 mL 1μg/ mL DAPI溶液，并在黑暗中于4°C染色2小時。
[使用DAPI進行細胞染色的例子]Vollenweider等人在磷酸化因子激活的殺傷（LAK）細胞的細胞增殖試驗中。
使用熒光打印機執行DAPI染色并進行測量（參考2）。
那時，請使用0.1 mg / mL的水溶液和1μg/ mL的甲醇溶液。
使用每孔100μL進行熒光染色。 |
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