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天恩澤 熒光及可視化RT-LAMP擴增試劑盒 200603-50，產品簡介：
產品品牌：天恩澤
產品名稱; 熒光及可視化RT-LAMP擴增試劑盒
產品貨號：200603-50
產品規格：50次
產品價格：1590元

天恩澤 熒光及可視化RT-LAMP擴增試劑盒 200603-50

我們上海金山科研平臺公司作為天恩澤公司的代理商，先簡單介紹一下天恩澤公司：

北京天恩澤公司的目標是研發出技術先進、質量穩定、價格合理的試劑精品。公司的創立宗旨是技術至上、質量至上、服務至上，公司的產品研發團隊均為高學歷并在海外有長期的科研經驗；公司的管理團隊已在行業內擁有超過20年管理經驗；同樣，公司的運營團隊也有豐富的執行經驗。

北京天恩澤公司充分了解客戶的需求，并努力創新以滿足客戶不斷發展的需求。我們將與我們的客戶共同成長，成為生物技術領域中zhuoyue產品和服務的jijia提供者。

DNAout、RNAout、Erasol、天凈沙、克必隆、歸去來、好亦多均為天恩澤基因注冊商標(試劑類)。

天恩澤 熒光及可視化RT-LAMP擴增試劑盒 200603-50，產品簡介：

產品品牌：天恩澤

產品名稱; 熒光及可視化RT-LAMP擴增試劑盒

產品貨號：200603-50

產品規格：50次

產品價格：1590元

天恩澤 熒光及可視化RT-LAMP擴增試劑盒 200603-50，產品說明：

本產品是根據本公司的雙染料 RT-LAMPzhuanli技術開發的熒光和可見光雙 模式RT-LAMP擴增及檢測試劑盒，它既可以用于熒光RT-LAMP擴增及檢測， 也可以用于可視化 RT-LAMP 擴增及檢測，適用于各種針對核酸的快速定性檢 測。本產品具有下列特點：

一般60分鐘內出結果（取決于靶分子濃度），比RT-PCR快約1小時 20 μL的反應體系，大樣品加樣量達到14 μL。

3. 含可見光和熒光染料，既可以用金屬浴和水浴擴增用可見光肉眼判斷結果， 也可用熒光PCR儀進行實時熒光檢測。

4. 內含的dUTP-UNG可防交叉污染。

5. 特異性比RT-PCR高，因為RT-LAMP 擴增使用4-6條引物而不是兩條。6. 靈敏性可達10拷貝/反應以下（隨引物而不同），故假陰性率更低。

7. 本產品跟北京天恩澤的多種免提取試劑盒（如免提病毒保存液）兼容。

8. 只可用于科研，只可進行定性檢測，不能用于定量檢測。

9. 本產品只適用于RT-LAMP 檢測，不適用于進行RT-LAMP檢測。

10. 本產品足夠50次20 μL體系的熒光及可視化RT-LAMP 擴增。

天恩澤 熒光及可視化RT-LAMP擴增試劑盒 200603-50，產品規格及成分：

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。

自備試劑 RT-LAMP模板及RT-LAMP 引物、PCR級石蠟油 （僅對使用金屬浴或水浴者） 。

天恩澤 熒光及可視化RT-LAMP擴增試劑盒 200603-50，使用方法：

準備工作：如果使用水浴鍋或金屬浴，需要在實驗啟動前打開并調到65℃。如 果用金屬浴，還必須在孔中加水以填充金屬孔和反應管間的空隙。本公司發現 很多水浴鍋或金屬浴溫度不準，故建議先用陽性對照和陰性對照測試所用儀器 在60℃、62.5℃、65℃、67.5℃和70℃五個溫度下擴增效果，選擇陽性和陰 性顏色差異大的溫度進行擴增

一、樣品RNA的制備

1. 用自選方法純化樣品 RNA，本試劑盒跟市場上大多數 RNA 提取試劑盒兼 容，可以選購本公司的各種免提取試劑盒。

2. 如果有 N 個樣品，則至少需要做 N+2 個樣品制備，包括一個制備陽性對 照（制備時加入自備的跟要檢測的靶分子相同的陽性對照模板，一起經歷提取過程）和一個制備陰性對照（用水替代樣品）。后N+2個樣品一起 進行RNA 提取操作，得到N+2個RNA 樣品。 二、配制并測試自備的20×RT-LAMP引物混合液

3. 用超純水將自備的6種（或4種）RT-LAMP引物干粉稀釋到母液濃度（100 μM），然后按下表配制100μL的20×RT-LAMP引物混合液，此混合液 足夠 100 次 20 μL 體系的 RT-LAMP 擴增。如果需要配制的 20× RT-LAMP引物混合液體積異于100 μL，則各成分的用量請按比例調整。 引物混合液可以在-20℃放置2年。

注意：總體積為100 μL。如果自備的RT-LAMP引物不含Loop引物，則按 上表配制時Loop用超純水替代，使得總體積為100 μL。

4. 測試引物的非特異擴增：在加模板和不加模板（至少1000拷貝/反應）的 RT-LAMP 系統中測試引物效果，引物選擇標準可以自己掌握，keyi選擇 無模板反應的Ct值比有模板反應的Ct值大60以上（每個循環1 分鐘） 的引物對。根據結果設定判斷陰性和陽性結果的閾值（本產品只用于定性）。 如果沒有 qPCR儀器，只能用肉眼檢測，則無需設定閾值，屆時靠跟陽性 對照和陰性對照管的顏色來判斷。

三、RT-LAMP擴增（20 μL體系）

5. 反應設置：如果有N+2個RNA純化樣品，則keyi設置N+5個RT-LAMP 擴增，增加擴增陽性對照、無模板對照和無引物對照各 1 個。在 N+5 個 0.2mL的PCR管中加入下列成分：

6. 混勻后進行擴增，可以根據實驗室條件選擇下列兩種方式進行擴增和檢測。

7. 如使用金屬浴、水浴或普通無熱蓋 PCR 儀，則每管加 30μL 石蠟油，再 65℃保溫120分鐘。如不加石蠟油，保溫期間水分蒸發，會有非特異擴增。

8. 如果使用熒光定量 PCR 儀：聚合溫度設為 65℃，1 次循環 1 分鐘，120 個循環，每分鐘在FAM通道采集一次熒光信號。

三、結果分析及解讀

9. 閾值設定：在*分鐘熒光值會升高再穩定，故只能取第10到15分鐘 的熒光值作閾值。此現象估計是常溫下可見光染料和熒光染料結合并對后 者有淬滅作用，加熱到65℃后兩種染料分開，淬滅逐漸解除，熒光逐漸升 高，10分鐘后穩定。沒加可見光染料的反應無此現象。

10. 所有陽性對照有陽性結果（Ct在閾值以內或反應液呈藍色），所有陰性對 照有陰性結果（Ct大于閾值或反應液呈淡藍色），否則提取實驗或擴增實 驗無效。需要尋找原因或跟廠家聯系，暫時不需要分析樣品的結果。

11. 如果陽性和陰性對照結果正常，則實驗有效，可以分析樣品的情況。如果 肉眼觀察，樣品管的顏色接近擴增陽性對照管則說明有擴增有靶分子，如 果接近無模板和無引物的陰性對照，則說明無擴增無靶分子。反應結果示 例如下（9為陰性，10為陽性）：

12. 如果是用熒光PCR儀，樣品Ct將小于閾值則為陽性，大于閾值則為陰性。

13. 當實時熒光檢測和可視化檢測同時使用時，如果不一致，以實時熒光 RT-LAMP的數據為準。一般可視化結果滯后實時熒光檢測結果20-30分 鐘，也就是說，在 qPCR 儀上第 30 分鐘時呈現陽性的樣品，其顏色變化 在第50-60分鐘時才能觀察到。

關聯產品 免核酸純化病毒保存液，PCR級石蠟油

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