簡要描述：
德國IBL基孔肯雅熱IgG檢測試劑（酶聯(lián)法）可用于人血清和血漿（檸檬酸鹽）中基孔肯雅熱IgG抗體的定性檢測。
基孔肯雅熱IgG檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：基孔肯雅熱IgG檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：Chikungunya IgG micro-capture ELISA
【產(chǎn)品規(guī)格】
96T
【預(yù)期用途】
試劑盒可用于人血清和血漿（檸檬酸鹽）中基孔肯雅熱IgG抗體的定性檢測。
【檢測原理】
試劑盒采用酶聯(lián)免疫法。微孔中預(yù)包被有抗人IgG，用于結(jié)合樣品中相應(yīng)的抗體。洗板后，去除非結(jié)合的樣品。再加入基孔肯雅熱抗原液，再次洗板后，再加入生物素化的基孔肯雅熱抗體。加入鏈霉親和素標(biāo)記結(jié)合物（酶聯(lián)物），與固相的特異性的基孔肯雅熱復(fù)合物結(jié)合。加入TMB底物液后，微孔中顯藍(lán)色。顯色的強(qiáng)度與病人樣品中基孔肯雅熱IgG抗體的量成正比。加入終止液終止酶反應(yīng)，形成黃色終點(diǎn)產(chǎn)物。后在酶標(biāo)儀處450 nm讀數(shù)。
【檢測方法】
試劑準(zhǔn)備
試驗(yàn)前，將所有試劑，樣品，質(zhì)控品平衡至室溫(20~25℃)
基孔肯雅熱抗原：
每瓶加入1mL稀釋洗滌液溶解，緩慢加入，室溫下靜置溫育15min，制成即用型抗原液。此抗原液在2~8 ℃可穩(wěn)定保存1天。
洗滌液：
1個(gè)單位的濃縮洗滌液+19個(gè)單位的雙蒸水。
如：10mL濃縮洗滌液+190mL雙蒸水。稀釋洗滌液在室溫下能穩(wěn)定保存5天。開瓶后，濃縮的洗滌液在2~8℃可穩(wěn)定保存至有效期.
檢測步驟
試驗(yàn)前，仔細(xì)閱讀說明書。嚴(yán)格執(zhí)行說明書要求才能得到優(yōu)質(zhì)結(jié)果。如試驗(yàn)使用自動(dòng)洗板機(jī)，建議每孔350µL，洗板5次（如手工洗，則每孔300µL，洗板3次）。試驗(yàn)前，確定好樣品，質(zhì)控品的加樣布局方案。取所需板條置于板架上。
至少設(shè)
1孔（如A1） 空白對照
1孔 (如B1) 陰性質(zhì)控
2孔 (如C1+D1） 臨界質(zhì)控
1孔（如E1） 陽性質(zhì)控
如覺得有必要，建議樣品和質(zhì)控品都作雙份檢測。
試驗(yàn)應(yīng)按同樣的加樣順序加取試劑，避免不同的時(shí)間間隔造成誤差。
使用新的一次性加樣槍頭，加各質(zhì)控品，樣品
調(diào)節(jié)恒溫箱為37±1℃
加50µL質(zhì)控品和稀釋樣品至相應(yīng)各孔中，設(shè)A1作為空白對照封板紙蓋板37 ± 1 ℃溫育1小時(shí)±5分鐘溫育后，移除封板紙，倒出微孔內(nèi)液體，每孔用300µL稀釋洗滌液，洗板3次，避免洗滌液相互溢濺至其它微孔。每次洗板時(shí)，浸泡時(shí)間應(yīng)大于5秒。后，在吸水紙上拍干，去除殘留液滴。
注意：洗滌步驟很關(guān)鍵。不充分的洗板，會(huì)導(dǎo)致不精確或錯(cuò)誤上升的吸光度值。
除空白對照孔（A1）外，加50µL基孔肯雅熱液抗原液至各孔，蓋板室溫下溫育30分鐘重復(fù)步驟4除空白對照孔（A1）外，加50µL基孔肯雅熱液抗體液至各孔，蓋板室溫下溫育30分鐘重復(fù)步驟4除空白對照孔（A1）外，各加50µL鏈酶親和素酶聯(lián)物至各孔，蓋板室溫下溫育30分鐘重復(fù)步驟4加100 µLTMB底物液至各孔中黑暗處，精確溫育15分鐘按加TMB底物液的順序和速度，加100 µL終止液至各孔中。
藍(lán)色溶液在孵育過程中變?yōu)辄S色。
注意：強(qiáng)陽性樣品會(huì)導(dǎo)致色原產(chǎn)生沉淀，沉淀的產(chǎn)生會(huì)對讀數(shù)產(chǎn)生影響。所以先用陰性基質(zhì)進(jìn)行預(yù)稀釋，建議1：1的比例稀釋，然后，再1個(gè)單位的預(yù)稀釋樣品+100個(gè)單位的樣品稀釋液。終結(jié)果（以U計(jì)算）乘以預(yù)稀釋因子2即可
加入終止液后，30分鐘內(nèi)，在酶標(biāo)儀450/620 nm處讀數(shù)
【結(jié)果計(jì)算】
用A1空白對照孔對酶標(biāo)儀進(jìn)行調(diào)零
如遇技術(shù)問題，酶標(biāo)儀不能調(diào)零。 所測樣品的吸光度值減去空白對照的讀數(shù)值，
即可得到可靠的讀數(shù)。
在酶標(biāo)儀處450 nm處測讀所有質(zhì)控品和樣品的吸光度值。620 nm作為參考波長。
如進(jìn)行雙孔檢測，計(jì)算吸光度均值。
實(shí)驗(yàn)有效性標(biāo)準(zhǔn)
如試驗(yàn)有效，必須滿足以下要求
·空白對照（A1）： 吸光度值< 0.100
·陰性質(zhì)控（B1）： 吸光度值<臨界讀數(shù)
·臨界質(zhì)控（C1+D1） 吸光度值0.150~1.300
·陽性質(zhì)控（E1） 吸光度值>臨界讀數(shù)
如上述標(biāo)準(zhǔn)沒滿足，試驗(yàn)視為無效，試驗(yàn)應(yīng)重測。
結(jié)果計(jì)算
臨界讀數(shù)是雙孔臨界質(zhì)控的吸光度均值
示范：臨界吸光度值0.39 +臨界吸光度值0.37＝0.76 / 2 = 0.38
即吸光度值＝0.38
德國IBL基孔肯雅熱IgG檢測試劑（酶聯(lián)法)
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