QIAGEN Proteinase K (10 ml)蛋白酶K
QIAGEN蛋白酶K
用于DNA和RNA制備過程中的蛋白酶消化
QIAGEN蛋白酶和QIAGEN蛋白酶K在廣泛的反應(yīng)條件下具有高活性的廣泛底物特異性。兩種蛋白酶均在大多數(shù)DNA和RNA分離程序中常用的緩沖液中提供高活性，并且由QIAGEN保證質(zhì)量。
QIAGEN蛋白酶是一種從重組芽孢桿菌菌株中分離的silu suan蛋白酶，是蛋白酶K的經(jīng)濟(jì)替代品，可從多種來(lái)源分離天然DNA和RNA。QIAGEN蛋白酶*不含DNase和RNase活性。
QIAGEN蛋白酶K是一種枯草桿菌蛋白酶型蛋白酶，從腐生真菌Tritirachium album中分離出來(lái)，特別適用于短消化時(shí)間。它具有很高的比活性，可以在很寬的溫度和pH值范圍內(nèi)保持穩(wěn)定，而在較高溫度下的活性大大提高。可溶性鈣對(duì)于酶活性不是必需的。這意味著用于抑制Mg 2 +依賴性酶（如核酸酶）的EDTA 不會(huì)抑制蛋白酶K的活性。
QIAGEN Proteinase K (10 ml)蛋白酶K
性能
QIAGEN Protease和QIAGEN Proteinase K在大部分DNA和RNA純化流程使用的緩沖液以及寬范圍的鹽、變性劑、洗滌劑、pH和溫度條件下都有高活性（見表“常用緩沖液中的蛋白酶活性"）。
常用緩沖液中的蛋白酶活性*| 緩沖液 | 活性(%) |
| QIAGEN Protease | QIAGEN Proteinase K |
|---|
| 30 mM Tris·Cl | 100 | 100 |
| 30 mM Tris·Cl; 30 mM EDTA; 5% Tween 20; 0.5% Triton X-100; 800 mM GuHCl? | 210 | 313 |
| 36 mM Tris·Cl; 36 mM EDTA; 5% Tween 20; 0.36% Triton X-100; 735 mM GuHCl? | 205 | 301 |
| 10 mM Tris·Cl; 25 mM EDTA; 100 mM NaCl; 0.5% SDS | 78 | 128 |
| 10 mM Tris·Cl; 100 mM EDTA; 20 mM NaCl; 1% Sarkosyl | 101 | 74 |
| 10 mM Tris·Cl; 50 mM KCl; 1.5 mM MgCl2; 0.45% Tween 20; 0.5% Triton X-100 | 159 | 106 |
| 10 mM Tris·Cl; 100 mM EDTA; 0.5% SDS | 98 | 120 |
| 30 mM Tris·Cl; 10 mM EDTA; 1% SDS | 38 | 203 |
* pH 8.0, 50°C, 1.25 µg/ml蛋白酶，孵育15 min。? QIAGEN Genomic-tip操作流程中使用的Buffer G2，用于從血液、細(xì)胞培養(yǎng)基和組織中純化DNA。? 用于細(xì)菌DNA純化的QIAGEN Genomic-tip實(shí)驗(yàn)方案中推薦的蛋白酶消化緩沖液條件（Buffers B1+ B2）。
原理
技術(shù)規(guī)格 | QIAGEN Protease | QIAGEN Proteinase K |
|---|
| 規(guī)格 | 凍干粉 | 即用型溶液 |
| 量 | 7.5 AU或4 x 7.5 AU | 2 ml或10 ml (20 mg/ml) |
| 活性 | 45 mAU/mg蛋白 | >600 mAU/ml |
| 單位定義 | 一個(gè)mAU是指每分鐘1 molluo an suan釋放的斐林陽(yáng)性的氨基酸和肽的活性 |
QIAGEN Proteinase K是從腐生菌Tritirachium album中提取的一種枯草桿菌蛋白酶，非常適合短時(shí)間消化。其特異性活性高，在很大的溫度和pH 值范圍內(nèi)可保持穩(wěn)定，并在高溫時(shí)具有更高活性。可溶性鈣在酶反應(yīng)中不是必須的。所以用于抑制核酸酶等Mg2+依賴性酶的EDTA將不會(huì)抑制Proteinase K的活性。以下QIAGEN試劑盒中包含有Proteinase K：
QIAGEN Protease是從重組Bacillus菌株中提取的一種蛋白酶，可替代Proteinase K從多種樣本中提取DNA和RNA，且價(jià)格較低。QIAGEN Protease沒有DNase 和RNase活性。以下QIAGEN試劑盒中包含有QIAGEN Protease：
注意：使用手動(dòng)QIAamp DNA Blood Kit和QIAGEN Blood & Cell Culture DNA Kit的用戶應(yīng)該用7 ml蒸餾水重懸每個(gè)瓶中的QIAGEN Protease。
注意：使用QIAamp DNA Blood BioRobot 9604 Kit的用戶應(yīng)該用10 ml蒸餾水重懸每個(gè)瓶中的QIAGEN Protease。
注意：QIAGEN蛋白酶不可與DNeasy Tissue、DNeasy 96 Tissue及QIAamp DNA Mini Kit中的ATL緩沖液同時(shí)使用。在SDS濃度大于0.5%、肌氨酰濃度大于1%、或有高濃度的其他去污劑時(shí)，EDTA的濃度必須小于8 mM，這樣才能在延長(zhǎng)的孵育時(shí)間內(nèi)達(dá)到an quan活性。
操作流程
QIAGEN Protease或QIAGEN Proteinase K的使用指南在相應(yīng)的試劑盒手冊(cè)中提供。
應(yīng)用
QIAGEN Protease和QIAGEN Proteinase K用于DNA和RNA制備過程中蛋白酶的消化。在設(shè)計(jì)蛋白酶消化時(shí)，應(yīng)考慮兩種酶之間的細(xì)微差異。
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