生物制藥中DNA殘留檢測——DNAExtractor?Kit
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生物制藥中DNA殘留檢測——DNA Extractor? Kit宿主細胞DNA(Host Cell Proteins)對于具有商業規模的生物藥品中，治療性蛋白藥物在細胞培養中的表達是一種比較便宜有效的方法。但是這些產品在生產和純化過程中，很容易引起宿主細胞DNA殘余污染。盡管殘余宿主細胞DNA對治療性蛋白藥物的影響在很大程度上還是未知的，但是也有研究表明宿主細胞DNA可能包含一些有害的DNA片段，使其具有傳染性和致瘤性。因此，在生物制藥中，對宿主細胞DNA的檢測是非常有必要的。 Wako（日本和光純藥）對于生物制藥中的宿主細胞DNA殘留，可提供以下試劑： DNA Extractor? Kit
295-50201 50tests
特點
可與Threshold系統配合使用進行 能用于生物制藥、血清中的DNA提取 單獨的離心管無交叉污染，提取的核酸可應用于下游實驗 可獲得高質量高回收率的DNA 使用的方法為碘化鈉法（Sodium Iodide Method），比傳統的方法更為環保 高靈敏度，可提取低至10pg的DNA
◆DNA Extractor? Kit實驗方案
方案1：血清中DNA提取操作步驟
試劑準備：
1） DNA提取之前，試劑提取如下：
26mL碘化鈉溶液加入6mL蒸餾去離子水稀釋，
再加入1mL月桂酰肌氨酸鈉和65μL糖原溶液并混合均勻。
2） 向洗滌溶液（B）加入2μL糖原溶液并立即混合均勻。
注意事項：
1）用于稀釋Nal溶液的蒸餾去離子水須去除DNA。
2）配制好的洗滌溶液（B）在 4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗滌溶液（B），加入糖原 溶液到無菌離心管中至
合適體積即可。
3）在保存期間Nal溶液會結晶，加熱溶液至50℃可幫助溶解。 DNA提取步驟：
1）吸取100μL的血清樣品加入1.5mL微量離心管；
2）再加入300μL配制好的Nal溶液至離心管并混合均勻；
3）將離心管在60℃恒溫容器中加熱15分鐘；
4）取出離心管，加入400μL異丙醇至離心管并混合均勻；
5）離心管在室溫靜置15分鐘后離心10,000g 15分鐘；
6）盡可能多地吸取上清液，將離心管倒置在紙面上除去殘留溶液；
7）加入1mL配制好的洗滌溶液（B）重懸浮得到的白色沉淀，并使白色沉淀從離心管壁上彈開；
8）短暫離心10,000g 5min，去除上清液，將剩余沉淀真空干燥，用于后續的DNA分析。
方案 2: Threshold* 系統DNA定量法的預處理
試劑預處理 :
1） 將65μL糖原溶液加入26mL碘化鈉溶液；
2） 將2μL糖原溶液加入40mL洗滌溶液（B），立即混合均勻。
注意事項：
1） 用于稀釋碘化鈉溶液的蒸餾去離子水須去除DNA。
2） 配制好的洗滌溶液（B）在 4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗滌溶液（B），加入糖原溶液到無
菌離心管中至合適體積即可。
3） 在保存期間碘化鈉溶液會結晶，加熱溶液至50℃可幫助溶解。
4） 提取步驟應在DNA變性之前，因此重要的是使用無菌技術盡可能降低DNA污染。預先包裝好的無
菌吸管、無菌試管和手套都要經過此步驟。
DNA提取步驟：
1） 吸取400μL或500μL的樣品加入2mL無菌帶蓋微量離心管并混合均勻；
2） 吸取20μL的月桂酰肌氨酸鈉溶液加入微量離心管并混合均勻；
3） 再加入500μL包含糖原的碘化鈉溶液至混合溶液，渦旋后在40℃保溫15分鐘；
4） 加入900μL異丙醇至混合溶液，渦旋后靜置于室溫15分鐘；
5） 短暫離心10,000g 15min后，能看見管壁有白色沉淀，吸取上清液后將離心管倒置于紙面去
除殘留溶液；
6） 加入800μL 洗滌溶液（A）至離心管，劇烈渦旋使白色沉淀從離心管壁上彈開；
7） 短暫離心10,000g 5min后，去除殘留溶液；
8） 加入1500μL包含糖原的洗滌溶液（B）至離心管并渦旋，短暫離心10,000g 5min后吸取上清液，
剩余的白色沉淀包括DNA和糖原載體；
9） 加入分析用緩沖液 (Zero Calibrator buffer) 使白色沉淀溶解，用于后續的DNA分析。
注意事項：
請于各步驟使用攪拌器將溶液攪拌均勻。樣品溶液里含有DNA酶時，進行步驟2之前請先進 行步驟3。步驟4里樣品溶解不完全時，請把保溫溫度升至40-60℃幫助溶解。但是含有部分蛋白（γ- 球蛋白）或高濃度蛋白的樣品（＞50mg/mL），加熱可能會導致蛋白聚集，請注意。
* 為Molecμlar Devices公司注冊商標，是使用生物傳感器的高靈敏度分析裝置。
參考文獻
1. Ishizawa, M., Kobayashi, Y., Miyamura, T. and Matuura,: Simple Procedure of DNA isolation from human seru
Nucleic Acids Res., 19, 5792 (1991)
相關資料：
DNA Extractor? Kit
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