凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)
純化得到至多500 μg無內毒素高轉染級純質粒或柯斯質粒DNA
純化得到的DNA內毒素低于0.1 EU/µg
純化流程快，同時去除內毒素
獲得高產量的高拷貝質粒DNA
使用LyseBlue，獲得的裂解和高產量的DNA
EndoFree Plasmid Kits基于陰離子交換技術，可快速制備不含內毒素的質粒DNA。QIAfilter Cartridges通過過濾快速澄清裂解液，DNA產量至多500 μg（Maxi）、2.5 mg（Mega）和10 mg（Giga）。制備的DNA純度超過兩次CsCl梯度離心法所得DNA的純度，非常適合超轉染級純的應用。
質粒純化方法與轉染效率。
使用兩種方法獨立制備pRSVcat，分別使用脂質體介導的方法轉染到COS-7、HeLa和LMH細胞中，及使用磷酸鈣轉染至Huh7細胞中。平均轉染效率以相對于QIAGEN Plasmid Kit制備的DNA的轉染效率表示。
凱杰試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)
性能
EndoFree Plasmid Maxi Kit將高效的內毒素去除步驟整合到質粒純化過程中，不需要額外步驟，也不需用親和柱去除脂多糖。通過QIAfilter Maxi Cartridge過濾細菌裂解液，通過重力流QIAGEN-tip 500陰離子交換柱純化質粒DNA。100–250 ml培養(yǎng)菌液至多可純化500 µg DNA。（培養(yǎng)量取決于質粒拷貝數(shù)量、插入片段大小、宿主菌和培養(yǎng)介質。）純化的DNA無內毒素（<0.1 EU/µg DNA）。
EndoFree Plasmid Kits去除細菌在裂解過程中釋放的內毒素，內毒素會影響原代細胞和敏感培養(yǎng)細胞的DNA轉染。從EndoFree Plasmid Kits得到的無內毒素DNA高度適用于可重復且結果可靠的轉染。QIAGEN超純無內毒素DNA也適用于基因治療研究和其他敏感應用。
質粒制備中的內毒素水平*| 質粒準備方法 | 內毒素(EU?/µg DNA) | 平均轉染效率? |
|---|
| EndoFree Plasmid Kit | 0.1 | 154% |
| QIAGEN Plasmid Kit | 9.3 | 100 |
| 2x CsCl | 2.6 | 99% |
| Silica-gel slurry | 1230.0 | 24% |
* 宿主菌：大腸桿菌DH5α 質粒：pRSVcat.? 1 ng LPS = 1.8 EU. ? 根據(jù)表中數(shù)據(jù)計算 "Plasmid purification method versus transfection efficiency".
無內毒素DNA配合原代細胞得到高轉染率*| DNA純化方法 | 轉染細胞百分比 |
|---|
| EndoFree Plasmid Kit | 21.0% ± 0.93 |
| QIAGEN Plasmid Kit | 8.1% ± 0.57 |
| Silica-gel slurry | 5.2% ± 0.74 |
* 原代兔胃壁細胞轉染pEGFP-N2（CLONTECH），pEGFP-N2由所示的方法制備。使用Effectene Transfection Reagent進行轉染。該數(shù)據(jù)是細胞表達GFP的百分率，由轉染48小時后綠色熒光細胞數(shù)量確定。轉染效率是每種純化方法制備的超過2個不同的DNA中6–9個復制樣本的平均值。（數(shù)據(jù)由C. Chew and J. Parente友情提供， Department of Molecular Medicine and Genetics, Medical College of Georgia, Augusta, Georgia, USA.）
原理
純化的質粒DNA內毒素污染水平取決于所用的純化方法。硅膠技術純化的DNA具有非常高的內毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和兩次CsCl超速離心可獲得相對低水平內毒素的純DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的內毒素去除步驟，獲得<0.1 EU/µg的質粒DNA。
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